簡易檢索 / 詳目顯示

回結果列表
研究生： 吳宜庭
Wu, Yi-Ting
論文名稱： 稻米芽鞘胰蛋白酶抑制劑之片段胜肽抑制胰蛋白酶及抗氧化活性之研究
The Protease Inhibition and Antioxidant Activities of Synthesized Peptides Based on the Rice Coleoptile Trypsin Inhibitor
指導教授： 黃福永
Huang, Fu-Yung
學位類別： 碩士
Master
系所名稱： 理學院 - 化學系
Department of Chemistry
論文出版年： 2017
畢業學年度： 105
語文別： 中文
論文頁數： 76
中文關鍵詞： 絲胺酸蛋白酶抑制劑 、胰蛋白酶抑制劑 、稻米芽鞘 、合成胜肽片段
外文關鍵詞： serine protease inhibitor, trypsin inhibitor, rice coleoptile, synthesized peptide
相關次數： 點閱：130  下載：0 
分享至:
查詢本校圖書館目錄 查詢臺灣博碩士論文知識加值系統 勘誤回報

    • Bowman-Birk型絲胺酸胰蛋白酶抑制劑是現今研究數量最多且廣泛的抑制劑之一，通常被稱為典型BBI ( classic BBI )。BBI已被發現存在豆類、穀類和禾本科植物中並且以雙子葉植物及單子葉植物來分類。雙子葉與單子葉植物的BBI組成是有差異的，其反應位置( reactive site )也不盡相同。雙子葉植物的BBI皆含有兩個反應位置可以活化，因此可以同時抑制胰蛋白酶( trypsin )、胰凝乳蛋白酶( α-chymotrypsin )及彈性蛋白酶( elastase )；來自單子葉植物的BBI有兩種類型，一種是由分子量8 kDa的單個多肽鏈所構成並且只有單一活性位置，而另一組為16 kDa的分子量具有兩個活性位置，研究顯示具有兩個活性位置的單子葉植物的BBI當其中一個活性位置被佔用時，蛋白酶結合的相對親和力會被改變。
    本研究合成三種模擬水稻胜肽片段之絲胺酸胰蛋白酶抑制劑：直鏈RD-14、直鏈MC-33及環狀RD-14 C3-C11並分別與胰蛋白酶及α-胰凝乳蛋白酶作用，已知水稻為單子葉植物因此藉由酵素動力學觀察其抑制類型、單一或雙活性位置及抑制劑與酵素親和力大小。
    最終，研究結果顯示胰蛋白酶和直鏈RD-14呈non-competitive 抑制作用、直鏈MC-33呈un-competitive抑制作而環狀RD-14 C3-C11呈partial uncompetitive抑制作用；α-胰凝乳蛋白酶則和直鏈RD-14呈competitive 抑制作用但直鏈MC-33和環狀RD-14 C3-C11則無呈現抑制反應。
    胰蛋白酶抑製劑在現今研究上已逐漸被證實具抗氧化活性，活性氧被認為是造成心臟病和衰老的原因而胰蛋白酶抑制劑能增強活性氧清除酶( oxygen species scavenging enzymes )的活性，因此本研究藉由氧化活性測試發現三種模擬水稻胜肽片段之絲胺酸蛋白酶抑制劑均具有抗氧化效力。胰蛋白酶抑制劑具抗活性氧能力並能與受體的結合能夠有效地降低蛋白酶的活性並抑制癌細胞對基底膜的浸潤，阻斷腫瘤細胞的轉移，因此三種模擬水稻胜肽片段之絲胺酸蛋白酶抑制劑：直鏈RD-14、直鏈MC-33及環狀RD-14 C3-C11作為因氧化而造成的疾病及癌症治療上具有發展的潛力。

    Three peptides based on the rice coleoptile trypsin inhibitor were designed and synthesized. These synthesized peptides were further to assay their activity toward inhibiting the trypsin and α-chymotrypsin activity by using L-BAPNA and BTEE as substrate, respectively.
    The result showed that three peptides do have the obviously activity to inhibit the trypsin showing non-competitive, partial uncompetitive and uncompetitive inhibition mode but they didn’t show the activity to inhibit the α-chymotrypsin. The antioxidant assays were carried out using DPPH as the substrate and showed these peptides all have antioxidant potential.

    中文摘要.....................･I 英文摘要.....................III 致謝......................VII 目錄.....................･･VIII 圖目錄.....................･･X 表目錄....................･･XVIII 第壹章 緒論 一. 模擬肽學( Peptidomimetics )...............1 二. 絲胺酸蛋白酶家族( Serine protease ) ............･1 三. 胰蛋白酶( Trypsin ).................･2 四. α-胰凝乳蛋白酶( α-Chymotrypsin ).............･2 五. 胰蛋白酶抑制劑..................5 六. Kunitz與Bowman-Birk型胰蛋白酶抑制劑...........5 七. 胰蛋白酶抑制劑類型與醫藥治療之應用...........･6 八. 酵素動力學...................･7 (一) Michaelis-Menten Equation...............･7 (二) Michaelis-Menten公式的意義..............･9 (三) Lineweaver-Burk equation雙倒數作圖...........･･10 九. 抑制劑對酵素活性的影響...............11 (一) 不可逆的抑制作用( Irreversible inhibiton ) ..........11 (二) 可逆的抑制作用( Reversible inhibiton ) ...........12 十. 胰蛋白酶抑制劑與抗氧化...............19 十一. 研究目的...................19 第貳章 實驗 一. 儀器.....................20 二. 實驗材料...................･･21 三. 實驗方法與步驟.................･･22 (一) 蛋白酶抑制劑的設計與合成..............22 (二) 溶液製備...................･31 (三) 抑制劑類型及活性測試...............･33 (四) 抗氧化活性測試.................･35 第參章 結果與討論 一. 抑制劑活性...................36 (一) 胰蛋白酶與抑制劑活性...............･36 (二) α-胰凝乳蛋白酶與抑制劑活性.............･･53 二. 抑制劑抗氧化活性.................70 三. 結論.....................73 參考文獻.....................75 圖目錄 圖一. Chymotrypsin 催化機制...............･4 圖二. 酵素催化反應時，受質濃度與反應速率關係圖........･･10 圖三. Lineweaver-Burk equation雙倒數作圖...........･11 圖四. Diisopropylfluorophosphate (DFP)其結構具氟化磷酸酯( fluorophosphonates )和serine protease作用的不可逆抑制反應.............12 圖五. 競爭型抑制作用(1) ................13 圖六. 競爭型抑制作用(2) ................13 圖七. Lineweaver-Burk equation雙倒數作圖-競爭型抑制作用(3) .....･13 圖八. 非競爭型抑制作用(1) ...............･14 圖九. 非競爭型抑制作用(2) ...............･14圖十. Lineweaver-Burk equation雙倒數作圖-非競爭型抑制作用(3) ....･･15 圖十一. 不競爭型抑制作用( Uncompetitive inhibition ) ........15 圖十二. 不競爭型抑制作用(2) ..............･･16 圖十三. Lineweaver-Burk equation雙倒數作圖-不競爭型抑制作用(3) ....16 圖十四. 二次作圖( secondary plot ) .............･18 圖十五. Lineweaver-Burk equation雙倒數作圖- clip 622和G6PD新超分子( new supramolecular )和酵素抑制作用-部分不競爭型抑制作用( Partial uncompetitive inhibition ) ....................･18 圖十六. 稻米芽鞘胰蛋白酶抑制劑胺基酸序列..........･22 圖十七. 三種抑制劑胺基酸序列與活性區域之對照.........23 圖十八. 稻米芽鞘胰蛋白酶抑製劑( RCTI )、小麥胚芽胰蛋白酶( wheat germ trypsin Inhibitors ) 11-4和I-2b和大豆Bowman-Birk抑製劑(大豆BBI)之間的一級序列( primary sequences )比較。(箭頭表示反應位置( reactive site )，相同的residues以方格圈起。) ........................23 圖十九. 直鏈模擬稻米芽鞘胰蛋白酶抑制劑RD-14高效液相層析儀圖譜 (high performance liquid chromatography, HPLC) ...........･･25 圖二十. 直鏈模擬稻米芽鞘胰蛋白酶抑制劑RD-14質譜圖(Mass Spectrometry, MS) 26 圖二十一. 環狀模擬稻米芽鞘胰蛋白酶抑制劑RD-14 C3-C11高效液相層析儀圖譜 (high performance liquid chromatography, HPLC) ..........27 圖二十二. 環狀模擬稻米芽鞘胰蛋白酶抑制劑RD-14 C3-C11質譜圖(Mass Spectrometry, MS) ..................･28 圖二十三. 直鏈模擬稻米芽鞘胰蛋白酶抑制劑MC-33高效液相層析儀圖譜 (high performance liquid chromatography, HPLC) ...........･･29 圖二十四. 直鏈模擬稻米芽鞘胰蛋白酶抑制劑MC-33質譜圖(Mass Spectrometry, MS) .......................･･30 圖二十五. 利用N-benzoyl-L-arginine-p-nitroanilide ( L-BAPNA )作為受質測試胰蛋白酶的活性.....................36 圖二十六. L-BAPNA 和trypsin結合時間對吸收質作圖。固定酵素 ( trypsin ) 濃度140 μM。由上至下分別加入受質 266.66、133.33、66.67、33.33 μM.....･･39 圖二十七. L-BAPNA 和trypsin在無添加抑制劑下的Michaelis–Menten saturation curve - [S]與V對照圖...................40 圖二十八. L-BAPNA 和trypsin在無添加抑制劑下的Lineweaver-Burk Plot - 1/[S]與1/V對照圖....................･40 圖二十九. Trypsin、蛋白酶-胰凝乳蛋白酶抑制劑( TCI )和L-BAPNA結合時間對吸收值作圖。固定酵素( Trypsin )濃度2.33 μM及抑制劑( TCI )濃度0.78 μM。由上至下分別為加入受質266.66、133.33、66.67、33.33 μM..........41 圖三十. Trypsin、蛋白酶-胰凝乳蛋白酶抑制劑( TCI )和L-BAPNA結合時間對吸收值作圖。固定酵素( Trypsin )濃度2.33 μM及抑制劑( TCI )濃度1.56 μM。由上至下分別為加入受質266.66、133.33、66.67、33.33 μM..........･･41 圖三十一. Trypsin、蛋白酶-胰凝乳蛋白酶抑制劑( TCI )和L-BAPNA結合時間對吸收值作圖。固定酵素( Trypsin )濃度2.33 μM及抑制劑( TCI )濃度3.12 μM。由上至下分別為加入受質266.66、133.33、66.67、33.33 μM..........42 圖三十二. Trypsin、蛋白酶-胰凝乳蛋白酶抑制劑( TCI )和L-BAPNA結合時間對吸收值作圖。固定酵素( Trypsin )濃度2.33 μM及抑制劑( TCI )濃度6.24 μM。由上至下分別為加入受質266.66、133.33、66.67、33.33 μM..........42 圖三十三. L-BAPNA 和trypsin在添加蛋白酶-胰凝乳蛋白酶抑制劑( TCI )下的Michaelis–Menten saturation curve - [S]與V對照圖.........･43 圖三十四. L-BAPNA 和trypsin在添加蛋白酶-胰凝乳蛋白酶抑制劑( TCI )下的Lineweaver-Burk Plot - 1/[S]與1/V對照圖............43 圖三十五. Trypsin、抑制劑 ( Linear inhibitor RD-14 )和L-BAPNA結合時間對吸收值作圖。固定酵素( Trypsin )濃度2.33 μM及抑制劑( RD-14 )濃度0.78 μM。由上至下分別為加入受質266.66、133.33、66.67、33.33 μM..........44 圖三十六. Trypsin、抑制劑 ( Linear inhibitor RD-14 )和L-BAPNA結合時間對吸收值作圖。固定酵素( Trypsin )濃度2.33 μM及抑制劑( RD-14 )濃度1.56 μM。由上至下分別為加入受質266.66、133.33、66.67、33.33 μM..........44 圖三十七. Trypsin、抑制劑 ( Linear inhibitor RD-14 )和L-BAPNA結合時間對吸收值作圖。固定酵素( Trypsin )濃度2.33 μM及抑制劑( RD-14 )濃度3.12 μM。由上至下分別為加入受質266.66、133.33、66.67、33.33 μM..........45 圖三十八. Trypsin、抑制劑 ( Linear inhibitor RD-14 )和L-BAPNA結合時間對吸收值作圖。固定酵素( Trypsin )濃度2.33 μM及抑制劑( RD-14 )濃度6.24 μM。由上至下分別為加入受質266.66、133.33、66.67、33.33 μM..........45 圖三十九. L-BAPNA 和trypsin在添加抑制劑( Linear inhibitor RD-14 )下的Michaelis–Menten saturation curve - [S]與V對照圖............･46 圖四十. L-BAPNA 和trypsin在添加抑制劑( Linear inhibitor RD-14 )下的Lineweaver-Burk Plot - 1/[S]與1/V對照圖...............･46 圖四十一. Trypsin、抑制劑( Cyclic inhibitor RD-14 C3-C11 )和L-BAPNA結合時間對吸收值作圖。固定酵素( Trypsin )濃度2.33 μM及抑制劑( MC-33 )濃度0.78 μM。由上至下分別為加入受質266.66、133.33、66.67、33.33 μM........47 圖四十二. Trypsin、抑制劑( Cyclic inhibitor RD-14 C3-C11 )和L-BAPNA結合時間對吸收值作圖。固定酵素( Trypsin )濃度2.33 μM及抑制劑( MC-33 )濃度1.56 μM。由上至下分別為加入受質266.66、133.33、66.67、33.33 μM........47 圖四十三. Trypsin、抑制劑( Cyclic inhibitor RD-14 C3-C11 )和L-BAPNA結合時間對吸收值作圖。固定酵素( Trypsin )濃度2.33 μM及抑制劑( MC-33 )濃度3.12 μM。由上至下分別為加入受質266.66、133.33、66.67、33.33 μM........48 圖四十四. Trypsin、抑制劑( Cyclic inhibitor RD-14 C3-C11 )和L-BAPNA結合時間對吸收值作圖。固定酵素( Trypsin )濃度2.33 μM及抑制劑( MC-33 )濃度6.24 μM。由上至下分別為加入受質266.66、133.33、66.67、33.33 μM........48 圖四十五. L-BAPNA 和trypsin在添加抑制劑( Cyclic inhibitor RD-14 C3-C11 )下的Michaelis–Menten saturation curve - [S]與V對照圖.........･49 圖四十六. L-BAPNA 和trypsin在添加抑制劑( Cyclic inhibitor RD-14 C3-C11 )下的Lineweaver-Burk Plot - 1/[S]與1/V對照圖............49 圖四十七. Trypsin、抑制劑( Linear inhibitor MC-33 )和L-BAPNA結合時間對吸收值作圖。固定酵素( Trypsin )濃度2.33 μM及抑制劑( MC-33 )濃度0.78 μM。由上至下分別為加入受質266.66、133.33、66.67、33.33 μM..........･･50 圖四十八. Trypsin、抑制劑( Linear inhibitor MC-33 )和L-BAPNA結合時間對吸收值作圖。固定酵素( Trypsin )濃度2.33 μM及抑制劑( MC-33 )濃度1.56 μM。由上至下分別為加入受質266.66、133.33、66.67、33.33 μM..........･･50 圖四十九. Trypsin、抑制劑( Linear inhibitor MC-33 )和L-BAPNA結合時間對吸收值作圖。固定酵素( Trypsin )濃度2.33 μM及抑制劑( MC-33 )濃度3.12 μM。由上至下分別為加入受質266.66、133.33、66.67、33.33 μM..........･･51 圖五十. Trypsin、抑制劑( Linear inhibitor MC-33 )和L-BAPNA結合時間對吸收值作圖。固定酵素( Trypsin )濃度2.33 μM及抑制劑( MC-33 )濃度6.24 μM。由上至下分別為加入受質266.66、133.33、66.67、33.33 μM..........･･52 圖五十一. L-BAPNA 和trypsin在添加抑制劑( Linear inhibitor MC-33 )下的Michaelis–Menten saturation curve - [S]與V對照圖............･52 圖五十二. L-BAPNA 和trypsin在添加抑制劑( Linear inhibitor MC-33 )下的Lineweaver-Burk Plot - 1/[S]與1/V對照圖............52 圖五十三. 利用N-Benzoyl-L-tyrosine ethyl ester ( BTEE )作為受質測試胰凝乳蛋白酶的活性.....................･･53 圖五十四. 固定α-Chymotrypsin和BTEE結合時間對吸收值作圖。固定酵素( α-Chymotrypsin ) 濃度，由上至下分別加入受質 1.18、0.59、0.30、0.15 mM..･･56 圖五十五. α-Chymotrypsin和BTEE在無添加抑制劑下的Michaelis–Menten saturation curve - [S]與V對照圖.................･56 圖五十六. α-Chymotrypsin和BTEE在無添加抑制劑下的Lineweaver-Burk Plot - 1/[S]與1/V對照圖...................･･57 圖五十七. α-Chymotrypsin、抑制劑( TCI 1.05 μM )和BTEE結合時間對吸收值作圖。固定酵素(α-Chymotrypsin )濃度及抑制劑( TCI 1.05 μM )濃度，由上至下分別為加入受質1.18、0.59、0.30、0.15 mM...............･57 圖五十八. α-Chymotrypsin、抑制劑( TCI 2.10 μM )和BTEE結合時間對吸收值作圖。固定酵素(α-Chymotrypsin )濃度及抑制劑( TCI 2.10 μM )濃度，由上至下分別為加入受質1.18、0.59、0.30、0.15 mM...............･58 圖五十九. α-Chymotrypsin、抑制劑( TCI 4.20 μM )和BTEE結合時間對吸收值作圖。固定酵素(α-Chymotrypsin )濃度及抑制劑( TCI 4.20 μM )濃度，由上至下分別為加入受質1.18、0.59、0.30、0.15 mM...............･58 圖六十. α-Chymotrypsin、抑制劑( TCI 8.40 μM )和BTEE結合時間對吸收值作圖。固定酵素(α-Chymotrypsin )濃度及抑制劑( TCI 8.40 μM )濃度，由上至下分別為加入受質1.18、0.59、0.30、0.15 mM................59 圖六十一. α-Chymotrypsi和BTEE在添加蛋白酶-胰凝乳蛋白酶抑制劑( TCI )下的Michaelis–Menten saturation curve - [S]與V對照圖.........･59 圖六十二. α-Chymotrypsin和BTEE在添加蛋白酶-胰凝乳蛋白酶抑制劑( TCI )下的Lineweaver-Burk Plot - 1/[S]與1/V對照圖............60 圖六十三. α-Chymotrypsin、抑制劑( Linear inhibitor RD-14 5.07 μM )和BTEE結合時間對吸收值作圖。固定酵素(α-Chymotrypsin )濃度及抑制劑( Linear inhibitor RD-14 5.07 μM )濃度，由上至下分別為加入受質1.18、0.59、0.30、0.15 mM.....･60 圖六十四. α-Chymotrypsin、抑制劑( Linear inhibitor RD-14 10.14 μM )和BTEE結合時間對吸收值作圖。固定酵素(α-Chymotrypsin )濃度及抑制劑( Linear inhibitor RD-14 10.14 μM )濃度，由上至下分別為加入受質1.18、0.59、0.30、0.15 mM...･･61 圖六十五. α-Chymotrypsin、抑制劑( Linear inhibitor RD-14 20.28 μM )和BTEE結合時間對吸收值作圖。固定酵素(α-Chymotrypsin )濃度及抑制劑( Linear inhibitor RD-14 20.28 μM )濃度，由上至下分別為加入受質1.18、0.59、0.30、0.15 mM...･･61 圖六十六. α-Chymotrypsin、抑制劑( Linear inhibitor RD-14 40.56 μM )和BTEE結合時間對吸收值作圖。固定酵素(α-Chymotrypsin )濃度及抑制劑( Linear inhibitor RD-14 40.56 μM )濃度，由上至下分別為加入受質1.18、0.59、0.30、0.15 mM...･･62 圖六十七. α-Chymotrypsin和BTEE在添加抑制劑( Linear inhibitor RD-14 )下的Michaelis–Menten saturation curve - [S]與V對照圖.........･62 圖六十八. α-Chymotrypsin和BTEE在添加抑制劑( Linear inhibitor RD-14 )下的Lineweaver-Burk Plot - 1/[S]與1/V對照圖............63 圖六十九. α-Chymotrypsin、抑制劑( Cyclic inhibitor RD-14 C3-C11 5.08 μM )和BTEE結合時間對吸收值作圖。固定酵素( α-Chymotrypsin )濃度及抑制劑( Cyclic inhibitor RD-14 C3-C11 5.08 μM )濃度，由上至下分別為加入受質1.18、0.59、0.30、0.15 mM.......................･･63 圖七十. α-Chymotrypsin、抑制劑( Cyclic inhibitor RD-14 C3-C11 10.16 μM )和BTEE結合時間對吸收值作圖。固定酵素( α-Chymotrypsin )濃度及抑制劑( Cyclic inhibitor RD-14 C3-C11 10.16 μM )濃度，由上至下分別為加入受質1.18、0.59、0.30、0.15 mM........................･･64 圖七十一. α-Chymotrypsin、抑制劑( Cyclic inhibitor RD-14 C3-C11 20.32 μM )和BTEE結合時間對吸收值作圖。固定酵素( α-Chymotrypsin )濃度及抑制劑( Cyclic inhibitor RD-14 C3-C11 20.32 μM )濃度，由上至下分別為加入受質1.18、0.59、0.30、0.15 mM.......................･･64 圖七十二. α-Chymotrypsin、抑制劑( Cyclic inhibitor RD-14 C3-C11 40.64 μM )和BTEE結合時間對吸收值作圖。固定酵素( α-Chymotrypsin )濃度及抑制劑( Cyclic inhibitor RD-14 C3-C11 40.64 μM )濃度，由上至下分別為加入受質1.18、0.59、0.30、0.15 mM.......................･･65 圖七十三. α-Chymotrypsin和BTEE在添加抑制劑( Cyclic inhibitor RD-14 C3-C11 )下的Michaelis–Menten saturation curve - [S]與V對照圖........･･65 圖七十四. α-Chymotrypsin和BTEE在添加抑制劑( Cyclic inhibitor RD-14 C3-C11 )下的Lineweaver-Burk Plot - 1/[S]與1/V對照圖...........66 圖七十五. α-Chymotrypsin、抑制劑( Linear inhibitor MC-33 2.077 μM )和BTEE結合時間對吸收值作圖。固定酵素(α-Chymotrypsin )濃度及抑制劑( Linear inhibitor MC-33 2.077 μM )濃度，由上至下分別為加入受質1.18、0.59、0.30、0.15 mM...･･66 圖七十六. α-Chymotrypsin、抑制劑( Linear inhibitor MC-33 4.154 μM )和BTEE結合時間對吸收值作圖。固定酵素(α-Chymotrypsin )濃度及抑制劑( Linear inhibitor MC-33 4.154 μM )濃度，由上至下分別為加入受質1.18、0.59、0.30、0.15 mM...･･67 圖七十七. α-Chymotrypsin、抑制劑( Linear inhibitor MC-33 8.308 μM )和BTEE結合時間對吸收值作圖。固定酵素(α-Chymotrypsin )濃度及抑制劑( Linear inhibitor MC-33 8.308 μM )濃度，由上至下分別為加入受質1.18、0.59、0.30、0.15 mM...･･67 圖七十八. α-Chymotrypsin、抑制劑( Linear inhibitor MC-33 16.616 μM )和BTEE結合時間對吸收值作圖。固定酵素(α-Chymotrypsin )濃度及抑制劑( Linear inhibitor MC-33 16.616 μM )濃度，由上至下分別為加入受質1.18、0.59、0.30、0.15 mM...･68圖七十九. α-Chymotrypsin和BTEE在添加抑制劑( Linear inhibitor MC-33 )下的Michaelis–Menten saturation curve - [S]與V對照圖.........･68 圖八十. α-Chymotrypsin和BTEE在添加抑制劑( Linear inhibitor MC-33 )下的Lineweaver-Burk Plot - 1/[S]與1/V對照圖............69 圖八十一. 抗壞血酸 (asorbic acid)對DPPH自由基清除率(%)......･70 圖八十二. 直鏈模擬稻米芽鞘胰蛋白酶抑制劑RD-14濃度對DPPH自由基清除率(%).......................･･71圖八十三. 環狀模擬稻米芽鞘胰蛋白酶抑制劑RD-14 C3-C11濃度對DPPH自由基清除率(%).....................･71 圖八十四. 直鏈模擬稻米芽鞘胰蛋白酶抑制劑MC-33濃度對DPPH自由基清除率(%).......................･･72 圖八十五. 三種模擬稻米芽鞘胰蛋白酶抑制劑之還原力比較圖.....･･72 表目錄 表一. 高效液相層析儀滯留時間及純度............･25 表二. 高效液相層析儀滯留時間及純度............･27 表三. 高效液相層析儀滯留時間..............･29 表四. 固定酵素濃( trypsin )及50 mM Tris buffer改變受質L-BAPNA濃度配製及純度.......................･･33 表五. 固定酵素α-Chymotrypsin、CaCl2及80 mM Tris-buffer濃度，改變受質BTEE濃度配製.....................34

    1. Hedstrom, L., Serine protease mechanism and specificity. Chemical reviews 2002, 102 (12), 4501-4524.
    2. Rawlings, N. D.; Barrett, A. J., [2] Families of serine peptidases. Methods in enzymology 1994, 244, 19-61.
    3. Green, T.; Ryan, C. A., Wound-induced proteinase inhibitor in plant leaves: a possible defense mechanism against insects. Science 1972, 175 (4023), 776-777.
    4. Li, Y.; Huang, Q.; Zhang, S.; Liu, S.; Chi, C.; Tang, Y., Studies on an artificial trypsin inhibitor peptide derived from the mung bean trypsin inhibitor: chemical synthesis, refolding, and crystallographic analysis of its complex with trypsin. The Journal of Biochemistry 1994, 116 (1), 18-25.
    5. Nelson, D. L.; Lehninger, A. L.; Cox, M. M., Lehninger principles of biochemistry. Macmillan: 2008.
    6. Michal, G.; Schomburg, D., Biochemical pathways: an atlas of biochemistry and molecular biology. Wiley New York: 1999.
    7. Dreon, M. S.; Ituarte, S.; Heras, H., The role of the proteinase inhibitor ovorubin in apple snail eggs resembles plant embryo defense against predation. PLoS One 2010, 5 (12), e15059.
    8. Habib, H.; Fazili, K. M., Plant protease inhibitors: a defense strategy in plants. Biotechnology and Molecular Biology Reviews 2007, 2 (3), 68-85.
    9. Wen, T.-J.; Hochholdinger, F.; Sauer, M.; Bruce, W.; Schnable, P. S., The roothairless1 gene of maize encodes a homolog of sec3, which is involved in polar exocytosis. Plant physiology 2005, 138 (3), 1637-1643.
    10. Laing, W.; McManus, M. T., Proteinase inhibitors. Protein-Protein Interactions in Plant Biology. CRC Press, Boca Raton, FL 2002, 77-119.
    11. Wan, H.; Lee, K. S.; Kim, B. Y.; Zou, F. M.; Yoon, H. J.; Je, Y. H.; Li, J.; Jin, B. R., A spider-derived Kunitz-type serine protease inhibitor that acts as a plasmin inhibitor and an elastase inhibitor. PLoS One 2013, 8 (1), e53343.
    12. Noonan, D. M.; Fulle, A.; Valente, P.; Cai, S.; Horigan, E.; Sasaki, M.; Yamada, Y.; Hassell, J. R., The complete sequence of perlecan, a basement membrane heparan sulfate proteoglycan, reveals extensive similarity with laminin A chain, low density lipoprotein-receptor, and the neural cell adhesion molecule. Journal of Biological Chemistry 1991, 266 (34), 22939-22947.
    13. Kobayashi, H.; Gotoh, J.; Hirashima, Y.; Terao, T., Inter--trypsin Inhibitor Bound to Tumor Cells Is Cleaved into the Heavy Chains and the Light Chain on the Cell Surface. Journal of Biological Chemistry 1996, 271 (19), 11362-11367.
    14. 曾國輝, 大學生物化學. 藝軒書局, 臺北 1993, 187-207.
    15. Shapiro, R.; Vallee, B. L., Interaction of human placental ribonuclease with placental ribonuclease inhibitor. Biochemistry 1991, 30 (8), 2246-2255.
    16. Lundblad, R. L., Chemical reagents for protein modification. CRC press: 2014.
    17. Berg, J. M.; Tymoczko, J. L.; Stryer, L., Biochemistry. 5th. New York: WH Freeman 2002, 38 (894), 76.
    18. 呂鋒洲; 林仁混, 基礎酵素學. 聯經出版事業公司: 1991.
    19. Whiteley, C. G., Enzyme kinetics: partial and complete uncompetitive inhibition. Biochemistry and Molecular Biology Education 2000, 28 (3), 144-147.
    20. Dutt, S.; Wilch, C.; Schrader, T., Artificial synthetic receptors as regulators of protein activity. Chemical Communications 2011, 47 (19), 5376-5383.
    21. Shamsi, T. N.; Parveen, R.; Fatima, S., Trypsin inhibitors demonstrate antioxidant activities, inhibit A549 cell proliferation, and increase activities of reactive oxygen species scavenging enzymes. Indian Journal of Pharmacology 2017, 49 (2), 155.
    22. Hou, W.-C.; Chen, Y.-C.; Chen, H.-J.; Lin, Y.-H.; Yang, L.-L.; Lee, M.-H., Antioxidant activities of trypsin inhibitor, a 33 KDa root storage protein of sweet potato (Ipomoea batatas (L.) Lam cv. Tainong 57). Journal of agricultural and food chemistry 2001, 49 (6), 2978-2981.
    23. Tashiro, M.; Hashino, K.; SHIOZAKI, M.; Ibuki, F.; Maki, Z., The complete amino acid sequence of rice bran trypsin inhibitor. The Journal of Biochemistry 1987, 102 (2), 297-306.
    24. Tepe, B.; Daferera, D.; Tepe, A.-S.; Polissiou, M.; Sokmen, A., Antioxidant activity of the essential oil and various extracts of Nepeta flavida Hub.-Mor. from Turkey. Food Chemistry 2007, 103 (4), 1358-1364.
    25. Shimada, K.; Fujikawa, K.; Yahara, K.; Nakamura, T., Antioxidative properties of xanthan on the autoxidation of soybean oil in cyclodextrin emulsion. Journal of agricultural and food chemistry 1992, 40 (6), 945-948.
    26. Oyaizu, M., Studies on products of browning reaction. The Japanese Journal of Nutrition and Dietetics 1986, 44 (6), 307-315.
    27. Cornely, K.; Crespo, E.; Earley, M.; Kloter, R.; Levesque, A.; Pickering, M., Kinetics of papain: An introductory biochemistry laboratory experiment. J. Chem. Educ 1999, 76 (5), 644.

    無法下載圖示 校內：立即公開
    校外：不公開
    電子論文尚未授權公開，紙本請查館藏目錄
    QR CODE