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研究生: 賴韋旭
Lai, Wei-Hsu
論文名稱: 3-(N-甲基胺基)甲基兒茶酚及3-胺基甲基兒茶酚與偏鄰苯二酚雙加氧酶的反應
The Reactions of 3-(N-Methylamino)methyl Catechol and 3-Aminomethyl Catechol with Metapyrocatechase
指導教授: 黃得時
Huang, Ded-Shih
學位類別: 碩士
Master
系所名稱: 理學院 - 化學系
Department of Chemistry
論文出版年: 2004
畢業學年度: 92
語文別: 中文
論文頁數: 86
中文關鍵詞: 加氧酶酵素抑制劑
外文關鍵詞: enzyme, oxygenase, inhibitor
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  •   由醱酵槽連續式醱酵的結果顯示所使用的培養基中苯甲酸鈉的濃度為細菌成長的限制量,另一個影響細菌培養時間的限制因素是單位時間空氣(氧氣)的供給量;當苯甲酸鈉的濃度為每升9克,空氣每分5升,轉速,攪拌每分600轉時所收集到的細菌最高濃度約為15 g/L。
      根據動力學所得到抑制劑3-氯兒茶酚,3-胺基甲基兒茶酚,及3-(N-甲基胺基)甲基兒茶酚的Ki值依序分別為1.86μM,65.98μM,及85.48μM。而3-胺基甲基兒茶酚,及3-(N-甲基胺基)甲基兒茶酚的Km值分別為53.94μM,70.93μM,影響Km及Ki值的最大因素應取決於取代基的大小,換句話說,3-取代基兒茶酚與偏鄰苯二酚雙加氧酶的結合階段主要是受立體效應的影響。
      3-胺基甲基兒茶酚及3-(N-甲基胺基)甲基兒茶酚使偏鄰苯二酚雙加氧酶失活的反應速率(Kinact)則分別為0.24 min-1,0.20 min-1。

      The results of cell culture experiments using semi-continuous fermentation system indicated that the benzoate is the limited species of the growth media. Another limited of growth factor is the oxygen supply. When the benzoate concentration was 9 g/L and the air supply was 5 L/min with the agitation speed of 600 rpm, a high yield (15g/L) of Pseudomonas cells can be obtained.
      The Ki’s of 3-chlorocatechol, 3-aminomethyl catechol and 3-(N-methylamino)methyl catechol against metapyrocatechase were 1.86μM, 65.98μM and 85.48μM, respectively. The Km’s of 3-aminomethyl catechol and 3-(N-methylamino)methyl catechol are 53.94μM and 70.93μM, respectively. These results indicated that the inhibition ability of the substituted catechol is government by the size of substituent in the 3-position of catechol.
      The inactivation constant of 3-aminomethyl catechol and 3-(N-methylamino)methyl catechol was also examined. The Kinact of these two inactivators are 0.24 min-1 and 0.20 min-1, respectively.

    目 錄 第 一 章 序 論 1 一、加氧酶(Oxygenase) 1 (一) 加氧酶的背景和定義 1 (二) 加氧酶的分類 3 1.單加氧酶(monooxygenases) 3 2.雙加氧酶(dioxygenases) 4 (三) 加氧酶的功能 4 二、雙加氧酶 5 (一) 雙加氧酶催化斷裂芳香環的反應模式 5 1.苯環碳1及碳2間的分解: 6 2.苯環碳2及碳3間的分解: 6 3.苯環碳1及碳6間的分解: 7 (二) 雙羥內、外雙加氧酶的催化反應比較 8 三、偏鄰苯二酚雙加氧酶 11 (一) 一般性質與背景介紹 11 (二) 影響酵素MPC活性的因子 14 1.抑制劑 14 2.pH值及緩衝溶液 14 3.氧氣 14 4.輔因子 15 5.有機溶劑 15 四、酵素動力學 15 (一) Michaelis-Menten 方程式 15 五、質譜儀技術應用於蛋白質序列分析 19 (一) 質譜儀(MS,mass spectrometry) 19 (二) 基質輔助雷射脫附游離法飛行時間質譜儀(MALDI-TOF MS) 20 (三) 電噴灑串聯式質譜儀(ESI tandem MS) 22 1.電噴灑游離 22 2.質量分析器 23 六、研究動機 25 第 二 章 實 驗 26 一、儀器與方法 26 二、細菌培養 33 (一) 小量培養 34 (二) 大量培養 36 三、酵素純化 37 (一) 初步處理(Crude extract) 37 (二) 鏈黴素處理(Streptomycin treatment) 37 (三) 丙酮處理(Acetone treatment) 38 (四) 二乙胺基乙基纖維素的層析(DEAE-Cellulose chromatography) 38 (五) 超過濾濃縮(Ultrafiltration concentration) 39 四、抑制劑的合成 39 (一) 3-胺基甲基兒茶酚 39 (二) 3-N-甲基(胺基甲基)兒茶酚 40 (三) 3-氯兒茶酚 40 五、偏鄰苯二酚雙加氧酶的動力學研究 42 (一) Ki的測試 42 1. 3-氯兒茶酚 42 2. 3-胺基甲基兒茶酚及3-N-甲基(胺基甲基)兒茶酚 42 (二) 基理型抑制劑的測試 43 1. 3-氯兒茶酚 43 2. 3-胺基甲基兒茶酚 43 3. 3-N-甲基(胺基甲基)兒茶酚 44 4. 厭氧環境下 44 第 三 章 結 果 45 一、細菌培養 45 (一) 小量培養 45 (二) 大量培養 45 二、3-取代基兒茶酚的合成 47 (一) 3-胺基甲基兒茶酚 47 (二) 3-N-甲基(胺基甲基)兒茶酚 47 (三) 3-氯兒茶酚 48 三、偏鄰苯二酚雙加氧酶的動力學研究分析 49 (一) 抑制劑的氧化反應 49 (二) 抑制劑的Km 49 (三) 抑制劑的Ki 52 1. 3-氯兒茶酚 53 2. 3-胺基甲基兒茶酚 56 3. 3-N-甲基(胺基甲基)兒茶酚 59 (四) 基理型抑制反應 62 1. 3-氯兒茶酚 63 2. 3-胺基甲基兒茶酚 67 3. 3-N-甲基(胺基甲基)兒茶酚 71 第 四 章 討 論 75 一、細菌培養 75 (一) 影響細菌成長因素之探討 75 (二) 碳源影響 77 二、基理型抑制反應 78 三、3-胺基甲基兒茶酚使偏鄰苯二酚雙加氧酶去活化的反應機構 80 (一) 化合物 1 ( M.W = Enzyme + 153 ) 80 (二) 化合物 2 ( M.W = Enzyme + 137 ) 81 (三) 化合物 3 ( M.W = Enzyme + 123 ) 82 參考文獻 83

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    下載圖示 校內:立即公開
    校外:2004-08-03公開
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