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研究生：	劉曉芸 Liu, Hsiao-Yun
論文名稱：	組織中膠原蛋白含量之分析 Analysis of collagen content in tissue
指導教授：	黃玲惠 Huang, Lynn L. H.
學位類別：	碩士 Master
系所名稱：	生物科學與科技學院 - 生物科技研究所 Institute of Biotechnology
論文出版年：	2003
畢業學年度：	91
語文別：	中文
論文頁數：	72
中文關鍵詞：	膠原蛋白、毛細管電泳儀
外文關鍵詞：	collagen, capillary electrophoresis
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膠原蛋白為生物體內重要的組成蛋白之一，並被廣泛應用於食品、化妝品、生醫材料等。目前定量總膠原蛋白含量的方法，以傳統羥脯胺酸化學定量分析法為主，過程繁雜耗時且無法確認所有之羥脯胺酸均源自於膠原蛋白。本研究以毛細管電泳儀建立更靈敏、快速、簡便且準確的膠原蛋白定量方法。本論文建立以毛細管電泳分析儀定量膠原蛋白的方法，並確認分析方法的專一性及再現性，此外動物各部位的組織分別以傳統羥脯胺酸化學分析法定量、毛細管電泳儀定量羥脯胺酸含量法定量、毛細管電泳儀直接定量膠原蛋白含量法定量，藉以比較各種定量分析方法之可行性與精確性。由於以上方法之實驗結果均在誤差範圍之內，顯示以毛細管電泳儀定量組織中膠原蛋白的方法確實可行，與至少需要7天的傳統羥脯胺酸化學分析方法比較，我們建立的以毛細管電泳分析儀定量膠原蛋白的方法確實可以更快速的得到正確的定量結果。

Collagen is an important component protein in organism. It has been widely applied in the industries of foods, cosmetics, biomaterials, etc. Its quantification is mainly based on the hydroxyproline assay of samples by chemical chromatic analysis. Since the method is somewhat tedious and non-specific to non-vertebrate samples, the current study focused on establishing an easy, sensitive, and accurate method for the quantification of collagen by using capillary electrophoresis. The specificity and reproducibility were first characterized after identifying the optimal assay system for collagen. Various animal tissues were analyzed by the traditional hydroxyproline assay, hydroxyproline quantification by capillary electrophoresis, and direct collagen quantification by capillary electrophoresis. Our results demonstrated that no significant difference appeared on the data measured by the above variant methods. This indicates that the quantification method developed by using capillary electrophoresis is feasible and accurate. One of the advantages is that our method vastly reduced the timing for waiting and working from about 7 days to less than 3 days which include the time for sample processing.

目   錄
中文摘要	Ⅰ
英文摘要	Ⅱ
誌謝	Ⅲ
目錄	Ⅵ
表目錄	Ⅷ
圖目錄	Ⅸ
	
第一章 緒論……………………………………………………………..	1
1.1 前言……………………………………………………………….	1
1.2 研究動機與目的………………………………………………….	1
1.3 膠原蛋白………………………………………………………….	2
1.3.1膠原蛋白分子特性與結構……………………………………	2
1.3.2膠原蛋白之種類………………………………….............	5
1.3.3膠原蛋白之生理意義……………………………………........	9
1.3.4膠原蛋白應用…………………………………...................	9
1.4目前已知分析膠原蛋白之方法…………………………………..	10
1.4.1臨床上膠原蛋白疾病的測定方法……………………………	10
1.4.2各種分析方法………………………………………................	10
1.4.3目前定量膠原蛋白的方法……………………………............	10
A. Hydroxyproline assay………………………………………..	10
B. Ninhydrin assay…………………………………………......	10
1.4.4目前分析膠原蛋白相關的方法…………………………........	11
A. 二維電泳法………………………………………….................  11
B. 高效率液相層析………………………………………….......	11
C. 免疫法……………………………………………….........	.........11
1.5 毛細管電泳………………………………….......................	12
1.5.1毛細管電泳原理與優點…………………………………........	12
1.5.2影響毛細管分離的因素…………………………………........	14
1.5.3毛細管電泳分析蛋白質……….……………………………...	15
1.5.4毛細管電泳之衍生應用…………………………………........	16
A. LIF測定方法…………………………………………..................16
B. LIF測定器與螢光衍生………………………………..........	16
1.6目前以毛細管電泳分離膠原蛋白的發展情形…………………..	17
1.6.1相關的研究……………………………..........................	17
1.6.2本實驗室的系統………………………………………............	18
	
第二章 實驗材料與方法………………………………………………..	19
2.1儀器設備…………………………………………………………..	19
2.1.1 毛細管電泳分析儀………………………………………….. 	19
2.1.2 毛細管……………………………………………………….. 	19
2.1.3 偵測器…………………………….......................... 	19
2.1.4 其他設備…………………………….......................... 	19
2.2藥品………………………………………………………..............	21
2.2.1 分析樣品…………………………............................ 	21
2.2.2 緩衝溶液…………………………………………................ 	22
2.2.3 其他藥品………....................................………	22
2.3實驗方法………………………………………………...............	23
2.3.1 樣品配製方法……………………………….....................	23
2.3.2 緩衝溶液配製方法………………………………................	23
2.3.3 動物組織處理方法……………………….......................	23
2.3.4 動物組織水分含量測試方法………………………………..	24
2.3.5 動物組織分析液配製方法…………………………..............	24
2.3.6 標準曲線製作....………………………….....................	24
2.3.7 胺基酸衍生反應………………………………...................	25
2.3.8 胺基酸分析方法……………………...........................	25
2.3.9 毛細管電泳儀操作條件………………………........………..	26
	
第三章 組織中總膠原蛋白含量分析方法建立………………………..	27
3.1 前言……………………………………………………………….	27
3.2 確定分析時最佳注射條件……………………………………….	27
3.3 確定分析緩衝溶液的條件………………………………………	28
3.4 組織中總膠原蛋白含量…………………………....……………	28
3.4.1 利用CE方法分析總膠原蛋白含量………………………...	28
3.4.2 每個分析之間毛細管的清洗步驟……………...................	29
3.4.3 確立分析峰之專一性………………...........................	29
3.4.4 找出偵測靈敏度之極限…….................................	30
    A. 最小偵測靈敏度……………….............................	30
3.4.5 建立濃度標準曲線.........................................	30
    A. 標準曲線之再現性............…………………..............	30
3.5 分析各部位組織之總膠原蛋白含量…………………………….	31
3.5.1 動物組織部位...................................……………	31
3.5.2 水分含量測試…….........................................	32
3.5.3 動物組織均質處理...........................…………...	32
3.6 以毛細管電泳儀定量動物組織的總膠原蛋白含量…………..... 	32
3.7 Hydroxyproline assay分析方法…………......................	33
3.8 膠原蛋白主要胺基酸定量分析………..........................	33
3.9 結論.......................................................	34
3.10 圖表...............................................	35
	
第四章不同型膠原蛋白之分析…………………………………………	51
4.1 前言……………………………………………………………….	51
4.2 膠原蛋白胺基酸序列分析……………………………………….	51
4.2.1切割後的片段數目與大小………………….....................	51
4.2. A處理得到多胜肽之特殊胺基酸數目與大小之預測……………...	51
4.3 結論………………………………........................……...	52
4.4 圖表……………………………………………………………….	53
	
第五章 參考文獻………………………………………………………..	54
	
附錄一	56
 
表 目 錄
表1.1  各型膠原蛋白之概述………………………………………...	6
表3.1  最小偵測靈敏度……………………………….......………...	41
表3.2  膠原蛋白分析峰之再現性……………………...........……...	42
表3.3  水分含量分析與化學方法分析組織中膠原蛋白含量……...	45
表3.4  膠原蛋白主要胺基酸數目含量表…………………………...	46
表3.5  不同分析方法測總膠原蛋白含量之實驗結果比較…….......	50
表3.6  組織樣品酸解以不同方法除去鹽酸之比較……...............	50
表4.1  不同型膠原蛋白經不同方法處理後之多胜肽片段數目.......	53
表4.2處理後不同型膠原蛋白含特殊胺基酸之多胜肽片段數目….......	53	
 
圖 目 錄
圖1.1  膠原蛋白結構示意圖....................................	4
圖3.1  分析緩衝溶液修飾......................................	35
圖3.2  樣品緩衝溶液的修飾.....................................	36
圖3.3  改變分析緩衝溶液.......................................	37
圖3.4  毛細管的清洗步驟........................................	38
圖3.5  實驗室抽取之膠原蛋白其分析峰之專一性…………….......	39
圖3.6  第一型至第五型膠原蛋白混合樣品其分析峰之專一性…...	40
圖3.7  膠原蛋白分析峰之再現性.................…………..	43
圖3.8  膠原蛋白之濃度標準曲線..................................	44
圖3.9 動物組織水分含量分析結果…………………………….......	45
圖3.10 混合胺基酸標準品之毛細管電泳分析圖譜………………...	47
圖3.11 毛細管電泳分析羥脯胺酸之濃度標準曲線...................	48
圖3.12 毛細管電泳分析皮膚組織中羥脯胺酸之含量...............	49
                                    

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校內：2026-09-08公開
校外：不公開電子論文尚未授權公開，紙本請查館藏目錄

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